Wartungs- und Verwendungsmethode des Ultrafiltrationsröhrchens

Wartungs- und Verwendungsmethode des Ultrafiltrationsröhrchens

Funktion des Ultrafiltrationsrohrs:

1) Konzentration; 2) Entsalzung; 3) Puffer ersetzen; 4) Es hat die Wirkung einer teilweisen Reinigung.

1. Das neue Ultrafiltrationsröhrchen kann ohne weitere Behandlung direkt verwendet werden;

2. Das Ultrafiltrationsröhrchen kann nicht bei hoher Temperatur sterilisiert werden;

3. Behandlung des Ultrafiltrationsröhrchens beim Wechsel von konzentriertem Protein

Das Ultrafiltrationsröhrchen kann wiederverwendet werden. Weichen Sie es in 0.1 M NaOH für 1-2 Stunden ein, waschen Sie es mit Wasser und waschen Sie es dann mit der entsprechenden Lösung (sterilisiertes Wasser oder PBS) dreimal in der Zentrifuge, die zum Konzentrieren von neuem Protein verwendet werden kann;

4. Behandlung eines normal platzierten Ultrafiltrationsröhrchens

Weichen Sie das häufig verwendete Ultrafiltrationsröhrchen in 0,1 M NaOH für 1–2 Stunden ein, waschen Sie es mit Wasser und weichen Sie es in sterilisiertem Wasser ein. Achten Sie darauf, die Filtermembran feucht zu halten und das Wachstum von Bakterien zu verhindern;

5. Behandlung eines Ultrafiltrationsröhrchens, das für eine lange Zeit platziert wurde

Wenn das Ultrafiltrationsröhrchen längere Zeit nicht verwendet wird, tränken Sie es 1–2 Stunden lang in 0,1 M NaOH, waschen Sie es mit Wasser und tauchen Sie es zur Aufbewahrung in 20-prozentigem Ethanol ein. Achten Sie darauf, die Filtermembran feucht zu halten und das Wachstum von Bakterien zu verhindern;

6. Zentrifugalgeschwindigkeit, die für das Ultrafiltrationsröhrchen verwendet wird

Die Zentrifugalgeschwindigkeit beträgt im Allgemeinen 4000 U / min (3000 g werden im Allgemeinen empfohlen, und das Maximum darf 4000 g nicht überschreiten). Nach Zentrifugation für 5-8 Minuten kann eine 4-ml-Probe auf weniger als 1 ml bis zu Dutzenden von Mikrolitern konzentriert werden; Wenn die Geschwindigkeit zu hoch ist, fällt das Zielprotein ab, was zum Verlust von Zielprotein führt; Niedrige Geschwindigkeit, zeitaufwändig und geringe Arbeitseffizienz;

7. Vorsichtsmaßnahmen, wenn der Pistolenkopf in das Ultrafiltrationsrohr ragt

Beim Hinzufügen von Proteinlösung oder Puffer zum Ultrafiltrationsröhrchen kann der blaue Pistolenkopf verwendet werden; Wenn jedoch das konzentrierte Zielprotein vom Boden des Ultrafiltrationsröhrchens absorbiert wird, muss der gelbe Pistolenkopf verwendet werden; Wenn der Pistolenkopf in das Ultrafiltrationsrohr eingeführt wird, muss verhindert werden, dass er die Filtermembran berührt, um ein Durchstechen der Filtermembran zu vermeiden;

8. Reduzieren Sie den Proteinadsorptionsverlust des Ultrafiltrationsröhrchens

Die Membran des Ultrafiltrationsröhrchens kann Protein adsorbieren, wodurch das Zielprotein um etwa 30 Prozent reduziert wird; Um den Proteinverlust zu reduzieren, spülen Sie nach dem Absorbieren der Zielproteinlösung den Boden des Ultrafiltrationsröhrchens mit Proteinpuffer, um den größten Teil des von der Filtermembran adsorbierten Proteins zu waschen und den Verlust des Zielproteins zu reduzieren; Wenn das gereinigte Protein konzentriert wird, achten Sie darauf, dass das konzentrierte Volumen nicht zu klein sein sollte; Im Allgemeinen werden, egal wie zentrifugiert, etwa 200 &mgr;l Proteinlösung am Boden zurückgehalten;

9. Wie man das Versagen des Ultrafiltrationsröhrchens definiert

Wenn die Filtermembran bei normalem Gebrauch nicht durchstochen ist, die konzentrierte Proteinlösung kein Protein enthält oder die Menge sehr gering ist (einschließlich Zielprotein), während die erste filtrierte Lösung Zielprotein enthält, weist dies darauf hin, dass die Filtermembran ungültig ist und muss durch ein neues Ultrafiltrationsröhrchen ersetzt werden.